1.2 方法1.2.1 供试品溶液的制备止血粉样品在烘箱中50℃烘至恒重后，称量3份，每份称取约5.0mg，分别溶于1mol/L三氟乙酸（TFA）溶液，配成浓度5mg/mL。

本试验主要对含量最高的，具有良好物化性质的TSG进行研究，因此将提取的粗TSG溶于去离子水调节至中性pH7.0再通过葡聚糖凝胶柱层析法纯化，获得高纯度TSG，冷冻干燥用于后续试验。DYY-7C垂直电泳仪，北京市六一仪器厂。

种仁则以蛋白质、多糖及脂肪等为主要成分，其中多糖约占种仁的60%，常作为增稠剂和稳定剂应用在食品、饮料及烟草工业上，而对于提取多糖后残渣的综合利用研究甚少。Reddy等研究表明提取多糖后的罗望子种仁残渣中仍含有丰富的蛋白质，在印度、苏丹等酸角主产国常被开发成饲料。1材料与方法1.1材料与试剂罗望子种仁提取多糖后残渣，来自云南猫哆哩集团食品有限责任公司。SDS、TEMED、丙烯酰胺、甲醇、冰醋酸、亚甲基双丙烯酰胺（均为分析纯），购于天津市志远化学试剂有限公司。CSH游离巯基含量，mol/g。

九三非转基因一级大豆油，购于九三粮油工业集团有限公司。1.3.4氨基酸的测定参照卫阳飞等的方法取0.50g蛋白样品加入10mL6mol/L的盐酸，于110.0℃水解24h，抽滤，经60.0℃反复旋转蒸发3次，定容至10mL，过0.45m的滤膜，样品备用。如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联系。

由图3可知，8批吴茱萸分为两大类，第一类：S1、S6、S7、S8和S9。2.9 加标回收试验选取已知含量的吴茱萸药材6份，每份精密称定25g，分别加入3种对照品适量，按照1.2.2方法分别制备含量约为100%的供试品溶液，在1.3.2气相色谱条件下进行测定，计算回收率和方法精密度，试验结果见表6如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联系。对4个不同产地的9批吴茱萸所测成分进行聚类分析处理，结果表明产地对吴茱萸中挥发性成分含量具有较大的相关性，对吴茱萸质量的均一性有影响。

S1、S6、S7、S8、S9聚为一类，分别产自陕西、贵州、浙江等地，结果表明产地的自然环境和种植条件对吴茱萸中挥发性成分有确切影响，因此在对吴茱萸药材进行质量控制时，有必要进行基源确证和挥发性成分的测定，以保证药材质量的均一性。由图3可知，8批吴茱萸分为两大类，第一类：S1、S6、S7、S8和S9。

由表6可知，3种挥发性成分的样品加标回收率为92.6%～103.2%，测定结果的相对标准偏差小于5%。除去单独成类S5，其余8批吴茱萸分为2类，S2、S3、S4聚为一类，3批药材均产自江西，且3种挥发性成分的含量高于另一类，江西作为吴茱萸药材的道地产区，纬度28左右，经度115左右，海拔105m左右，环境适宜，生产的吴茱萸品质较高。采用所建的气相色谱法同时测定吴茱萸药材中-蒎烯、柠檬烯及罗勒烯3种挥发性成分的含量。2.9 加标回收试验选取已知含量的吴茱萸药材6份，每份精密称定25g，分别加入3种对照品适量，按照1.2.2方法分别制备含量约为100%的供试品溶液，在1.3.2气相色谱条件下进行测定，计算回收率和方法精密度，试验结果见表6。

2.11 聚类分析采用SPSS22.0统计软件，对表7中4个产地的9批吴茱萸所测成分进行聚类分析处理，用组间联结法，以Euclidean距离作为吴茱萸样品的测度，9批吴茱萸挥发性成分的聚类分析树状图见图2。分析发现S5江西野生中花吴茱萸的挥发油含量远高于其余8批吴茱萸药材，将S5的数据去除掉之后，剩余8批吴茱萸挥发性成分聚类分析谱系图见图3。结果显示，S5吴茱萸中所测挥发性成分含量最高，为3.8060%，S7吴茱萸中所测挥发性成分含量最低，为0.0675%，相差56倍，其原因可能有植物遗传作用、产地的生长条件（海拔、水分、土壤、日照和地形等环境因素）、贮存环境等。表明该方法具有较高的准确度和精密度，满足分析要求。

由表7可知，不同产地的吴茱萸中3种挥发性成分含量差异较大，其中来自江西产地的吴茱萸中3种挥发性成分的含量普遍偏高。相关链接：吴茱萸，-蒎烯，柠檬烯声明：本文所用图片、文字来源《化学分析计量》，版权归原作者所有。

2.10 样品含量测定分别精密称取50g不同产地的吴茱萸，按1.2.2制备供试品溶液，在1.3.2气相色谱条件下测定，3种挥发性成分的测定结果见表7。3 结语采用气相色谱质谱法鉴定出吴茱萸挥发油中的33种化学成分，建立了同时测定吴茱萸中-蒎烯、柠檬烯及罗勒烯3种挥发性成分的气相色谱法，并应用所建方法测定了9批不同来源的吴茱萸中-蒎烯、柠檬烯及罗勒烯3种成分的含量，表明不同来源和产地的吴茱萸药材中3种挥发性成分含量差异较大。

由图2可知，4个不同产地的9批吴茱萸药材可分为两类，其中S5单独为一类，其余8批吴茱萸药材聚为一类由图1可见，-蒎烯、柠檬烯和罗勒烯与相邻色谱峰分离良好，拖尾因子在0.95～1.05之间。以3种挥发性成分的质量浓度为横坐标（x），以色谱峰面积为纵坐标（y）绘制标准工作曲线。2.3 检测指标的选择GCMS法鉴定结果表明，吴茱萸中的挥发性成分主要包括倍半萜烯类、醇类、酯类等物质，其中-蒎烯和柠檬烯是较为常见的倍半萜化合物，罗勒烯是一种无环单萜类化合物，具有多种生理活性，如镇咳、祛痰、抗真菌、抑制肿瘤等，因此测定吴茱萸中-蒎烯、柠檬烯及罗勒烯3种挥发性成分的含量对吴茱萸的质量控制有重要意义。如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联系。由表3可知，测定结果的相对标准偏差为1.0%～1.3%，表明该仪器的精密度良好。

按照3倍信噪比计算方法的检出限，-蒎烯、柠檬烯及罗勒烯的线性范围、线性方程、相关系数及检出限见表2。2.4 色谱图分别取混合对照品溶液和供试品溶液，在1.3.2气相色谱条件下进样测定，典型色谱图见图1。

由表5可知，-蒎烯、柠檬烯及罗勒烯峰面积的相对标准偏差分别为3.6%、1.7%、3.9%，表明该方法重复性良好。2.5 线性关系和检出限在1.3.2气相色谱条件下，对系列标准混合工作溶液进行测定，记录-蒎烯、柠檬烯及罗勒烯的色谱峰面积。

2.7 稳定性试验取适量供试品溶液，在室温下放置0、2、4、8h时，分别在1.3.2气相色谱条件下进行测定，试验结果见表4。由表2可知，3种挥发性成分在各自的质量浓度范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系，相关系数均大于0.999，检出限为1.6～2.0g/mL，表明该方法灵敏度较高。

2.6 仪器精密度试验取一种混合标准工作溶液，按照1.3.2气相色谱条件重复进样6次，测定结果见表3。2.8 重复性试验取来源于浙江的吴茱萸样品6份，按1.2.2方法制备供试品溶液，在1.3.2气相色谱条件下分别进样测定，试验结果见表5。由表4可知，-蒎烯、柠檬烯及罗勒烯色谱峰面积测定结果的相对标准偏差分别为0.8%、0.8%和1.5%，表明供试品溶液在室温条件下8h内是稳定的。相关链接：吴茱萸，柠檬烯，-蒎烯声明：本文所用图片、文字来源《化学分析计量》，版权归原作者所有

由表5可知，-蒎烯、柠檬烯及罗勒烯峰面积的相对标准偏差分别为3.6%、1.7%、3.9%，表明该方法重复性良好。按照3倍信噪比计算方法的检出限，-蒎烯、柠檬烯及罗勒烯的线性范围、线性方程、相关系数及检出限见表2。

如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联系。由表4可知，-蒎烯、柠檬烯及罗勒烯色谱峰面积测定结果的相对标准偏差分别为0.8%、0.8%和1.5%，表明供试品溶液在室温条件下8h内是稳定的。

2.4 色谱图分别取混合对照品溶液和供试品溶液，在1.3.2气相色谱条件下进样测定，典型色谱图见图1。由图1可见，-蒎烯、柠檬烯和罗勒烯与相邻色谱峰分离良好，拖尾因子在0.95～1.05之间。

相关链接：吴茱萸，柠檬烯，-蒎烯声明：本文所用图片、文字来源《化学分析计量》，版权归原作者所有。2.7 稳定性试验取适量供试品溶液，在室温下放置0、2、4、8h时，分别在1.3.2气相色谱条件下进行测定，试验结果见表4。由表3可知，测定结果的相对标准偏差为1.0%～1.3%，表明该仪器的精密度良好。以3种挥发性成分的质量浓度为横坐标（x），以色谱峰面积为纵坐标（y）绘制标准工作曲线。

由表2可知，3种挥发性成分在各自的质量浓度范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系，相关系数均大于0.999，检出限为1.6～2.0g/mL，表明该方法灵敏度较高。2.5 线性关系和检出限在1.3.2气相色谱条件下，对系列标准混合工作溶液进行测定，记录-蒎烯、柠檬烯及罗勒烯的色谱峰面积。

2.6 仪器精密度试验取一种混合标准工作溶液，按照1.3.2气相色谱条件重复进样6次，测定结果见表3。2.8 重复性试验取来源于浙江的吴茱萸样品6份，按1.2.2方法制备供试品溶液，在1.3.2气相色谱条件下分别进样测定，试验结果见表5。

2.3 检测指标的选择GCMS法鉴定结果表明，吴茱萸中的挥发性成分主要包括倍半萜烯类、醇类、酯类等物质，其中-蒎烯和柠檬烯是较为常见的倍半萜化合物，罗勒烯是一种无环单萜类化合物，具有多种生理活性，如镇咳、祛痰、抗真菌、抑制肿瘤等，因此测定吴茱萸中-蒎烯、柠檬烯及罗勒烯3种挥发性成分的含量对吴茱萸的质量控制有重要意义据悉，江西市综合检验检测院高度重视参加各种能力验证活动，以此推动检验检测技术人员的能力和水平，促进技术机构的能力建设。

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